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AAV 腺相关病毒
基因操作

内源性基因转录激活/抑制

　　通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点，Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白，dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上，在此基础上，研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件，如转录激活的VP64、VP16等，转录抑制的KRAB等，同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游，即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。

 优势

　　① 常规基因过表达都是将外源基因转入，外源基因的兼容性必然低于内源基因。
　　② 对于一些涉及多次跨膜的蛋白，外源转入的基因常表达功能不完整的蛋白，导致过表达无效，而对内源基因的转录激活无需担心此问题。
　　③ 由于容量问题，很多大的基因片段难以构建进载体，而基于dCas9蛋白的转录激活识别的是转录起始点，对于基因大小无要求，因此可用于研究大基因片段的过表达。

 载体选择（部分）

可以对特定基因进行内源性的转录激活或抑制。
载体类别 编号 载体元件
CRISPRa（转录激活）慢病毒载体 H7284

pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-MCP-P65-HSF1-IRES-BSR-WPRE

H7281

pLenti-CMV-dCas9-VP64-T2A-Puro-WPRE

H9517

pCLenti-U6-gRNA-MS2-EFS-dCas9-VP64-T2A-BSD-WPRE

E2577

pCLenti-EF1a-MCP-P65-HSF1-T2A-Hygro-WPRE
CRISPRa（转录抑制）慢病毒载体

H6929

pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-NLS-MCP-KRAB-IRES-BSR-WPRE

H7283

pLenti-CMV-dCas9-KRAB-T2A-Puro-WPRE

 相关技术服务

  • 基因过表达

  • 基因干扰

  • CRISPR/Cas9


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